B6-IL27tm1小鼠,動物試驗

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基本信息

品系名稱：B6-IL27^tm1小鼠

英文名稱：B6-IL27^tm1 mouse

疾病名稱：腫瘤、自身免疫疾病、炎癥、傳染性疾病

相關基因：IL-27

背景品系：C57BL/6J

遺傳類型：基因敲除

繁殖方式：HOM X HOM

繁殖代數：NA

研究用途：用于研究腫瘤、自身免疫疾病、炎癥、傳染性疾病等及信號轉導方面的研究。

飼養環境：屏障或隔離環境

培育單位：北京華阜康生物科技股份有限公司、中國醫學科學院醫學實驗動物研究所

保種單位：中國醫學科學院醫學實驗動物研究所

資源鑒定：否

鑒定日期：暫無介紹

特征描述

1IL-27組成及其產生

IL-27是 2002年6月美國DNAX 研究所的Pflanz等發現并命名的一種新的IL-6/IL-12家族細胞因子，由 EBI3(與 IL-12p40亞基同源)和 p28(與IL-12p35亞基 同源 )兩條多肽鏈通過二硫鍵連接構成的異源二聚體。EBI3是一種可溶性細胞因子受體，最初在 EB病毒轉化的B細胞培養上清中被發現，后來在體內的研究中發現活化的抗原提呈細胞亦可高效表達EBI3，由于其缺乏膜結合位點故被認為是一種分泌蛋。p28是 Pflanz等在基因庫中找到的一種與 IL-6／IL-12家族細胞因子同源的長鏈四螺旋多肽，人p28基因位于染色體 16pl1上。p28在人和鼠的同源性為73％，它的 cDNA序列分別編碼243和 234個氨基酸多肽，蛋白質分子量分別為24.5和 23.6kDa。IL-27與 IL-12的其它兩種家族成員 IL-l2和IL-23這三種細胞因子都是包含相關螺旋亞單位(IL-12p35、IL-23p19和 IL-27p28)及可溶性細胞因子受體亞單位 (IL-12p40、IL-23p40和 IL-27EBI3)的異源二聚體 ，因此在結構上具有高度相似性 ，而且均由活化的抗原提呈細胞即單核巨噬細胞和樹突狀細胞 (dendritic cells，DCs)產生。EBI3的表達與病原體或宿主受到 LPS、CD40配體及炎癥性細胞因子刺激有關。與 IL-12p35相似 ，IL-27p28必須和 EBI3結合后才能被有效地分泌到細胞外發揮免疫功能。病理情況下 IL-27的高表達發生于感染 Mycobacteriatuberculosis、Trichurismuris和 Toxoplasmagondii等病原體后發生炎癥反應階段。同樣 ，IL-27也高表達于 自身免疫性疾病如人類 Crohn’S病以及小鼠多發性硬化(multiple sclerosis，MS)、實驗性腦脊髓膜炎(experiment autoimmune encephalomyelitis，EAE)和慢性 T．gondii感染等中樞神經系統的星形膠質細胞和小膠質細胞。刺激人類單核細胞起源的樹突狀細胞 (monocyte—derived DCs，MoDCs)和 小鼠骨髓起源的樹 突狀細胞 bone marrow—derived dendritic cells，BMDCs)以及應用toll樣受體激動劑 (toll—like receptor，TLR)刺激單核巨噬細胞能夠升高 IL-27的表達[1]。

IL-27促進 1型免疫反應

IL-27在促進 Thl型免疫反應中起重要作用。機體對胞內病原體感染的控制需要建立有效的Thl型免疫反應。從初始 CD4+T細胞向 Thl細胞分化時需要 細胞受體的激活和抗原提呈細胞分泌的Thl型細胞因子的刺激作用。許多體內外實驗結果顯示，如果小鼠缺乏IL-27R則 Thl型免疫反應減弱，提示IL-27／IL-27R可能直接參與 Thl細胞分化和促進初始 CD4+T細胞的增殖而增強 Thl型免疫反應的發生。最初研究認 為，抗原提呈細胞只有在 IL-12存在的情況下才能夠產生 IL-27，并進一步活化初始CD4+T細胞和 NK細胞產生 IFN-γ。IL-12是促進Thl細胞發育的關鍵性細胞因子，它通過激活STAT4促進初始 CD4+T細胞向 Thl細胞分化。然而靜息的初始 CD4+T細胞不表達 IL-l2受體的B2亞單位(IL-12Rβ2)，而 T-bet是在 Thl細胞發育過程中具有中心作用的轉錄因子，T-bet的一個重要功能就是誘導初始 CD4+T細胞 IL-12Rβ2的表達 ，使其獲得對 IL-12的反應性 。故 IL-27協同 IL-12促進初始 CD4+T細胞產生IFN-γ的機制被認為是：IL-27通過 T-bet誘導IL-12Rβ2的表達 ，進而在IL-12的作用下向 Thl細胞分化并分泌 IFN-γ。但后來研究證明，病原體或 LPS也可以 IL-12非依賴的形式刺激抗原提呈細胞分泌 IL-27，進而作用于CD4+T細胞和 NK細胞。其分子基礎可能是 IL-27R活化 STAT1，增加轉錄子 T-bet表達 ，進而作用于靶基因 IL一12Rβ2和 IFN-γ等的轉錄 。Lucas等研究發現在無 IL-12存在時 ，IL-27還可上調初始CD4+T細胞 ICAM-1的表達，通過ICAM-1／LFA-1(LFA-1由抗原提呈細胞表達)的相互作用促進其向Thl細胞分化 ，說明 IL-27亦可通過與IL-12不同的途徑促進Th1分化。IL-27的這種作用通過也是STAT1介導而不依賴STAT4，STAT3可能在IL-27誘導初始 CD4+T細胞增殖反應中發揮重要作用 ，因此，IL-27通過不同的信號轉導途徑發揮不同生物學活性。

IL-27對 Thl型免疫的負調控作用

IL-27不僅能夠促進初始CD4+T細胞的增殖和向Thl細胞分化而增強 Thl型免疫反應的發生，也可對Thl反應發揮反饋調控作用，能夠限制 Thl型免疫反應的強度和持續時間，以防止機體過度免疫反應引起的病理性損傷 。因此，IL-27對Thl型免疫反應具有雙重調節作用。

感染T.gondii的IL-27R-/-小鼠雖然能建立有效的Thl型免疫反應，但是在感染后期不能下調這種保護性反應，IL-27 R-/-小 鼠 Thl細 胞 較 正 常 Thl細胞具有更強的增值反應，最終發展成以過量IFN-γ產生及 T細胞過增殖為特征的致死性炎癥反應，提示 IL-27可通過抑制Thl細胞增殖而控制Thl型免疫的強度。同樣 ，與野生型小鼠相比，感染Trypanosma cruzi（T.cruzi)的 IL-27R 小鼠發生Thl介導的嚴重肝臟損傷，。Holscher究表明雖然在感染 Mycobacterium tubercuzosis后病原體清除依賴于 Thl型細胞免疫反應中 CD4+T細胞和IFN-γ 的產生，在 IL-27R-／-小 鼠感染結核晚期卻產生大量IFN-γ 等促炎細胞因子，引起廣泛的炎癥反應而加速了死亡。Yamanakaiz采用注射ConA誘導肝炎的非病原體感染的小鼠動物模型研究表明缺乏IL-27后NKT細胞能夠產生大量的IFN-γ 使其易感性增加。這些研究提示IL-27對過度Thl型免疫反應具有抑制作用。IL-27R-／-小 鼠是公認的促進Thl增殖和維持其生存的細胞因子，在體外分化實驗中，IL-27R小鼠的CD4+T細胞產生的IL-2比野生型的多而加人rlL-27能抑制 IL-2mRNA和蛋白的表達，說明IL-27有抑制 IL-2產生的作用。此外，IL-27可以協同 IL-12抑制 IL-2的分泌，因而IL-27和 IL-12都具有抑制 IL-2的作用，而相關的細胞因子IL-6和IL-23沒有這種特性。IL-27抑制 IL-2產的作用依賴 STAT1途徑，而不是STAT3、STAT4和 T-bet，這種抑制作用與抑制性細胞因子信號 (suppressor of cytokine signaling，SOCS)3 的表達高度相關，而SOCS3是一種炎癥反應的抑制性蛋白。IL-27誘生的 SOCS3的表達在Thl效應的負反饋調節機制中起著關鍵性的作用。 因此，IL-27能夠通過上調SOCS3的表達抑制lL-2的分泌和IL-2介導的Thl型細胞增殖。

IL-27可作為 Th2型反應的抑制劑

IL-27不僅可對Thl反應起負調控作用，對 Th2反應也可發揮抑制作用 。體外實驗利用分選的小鼠cD4+T 細胞研究發現 ，盡管IL-4能夠促進 IL-13的分泌 ，但給予IL-27后 IL-13的分泌量明顯降低。Th2分化過程 中，IL-27R 的 CD4+T細胞比野生型CD4+T產生更多的 IL-5和 IL-13，說明 IL-27直接抑制 CD4+T細胞產生IL-4。在體內試驗中，L．major感染早期產生以 IL-4高表達為特征性的免疫反應，利用IL-27R-／-小鼠建立動物模型研究發現，小鼠表現出的早期易感性與 Th2反應的加強和Thl細胞產生減少有關，這與普遍認同的 IL-27提高Thl活性的觀點一致 ，但在感染晚期因為缺乏 IL-27R形成了 L．major特異性 Thl細胞并控制了感染。在此過程中IL-27的主要作用是限制了早期 Th2活性而不是影響Thl型免疫反應。預先給與 WSX-1-／- 鼠IL-4特異性抗體能夠逆轉此早期易感性，說明缺乏IL-27則可使Th2活性增強。同樣，在哮喘和腎小球腎炎動物模型中，缺乏 IL-27R的小鼠炎癥反應加劇與Th2反應增強有關。IL-27通過抑制轉錄子GATA-3的表達直接抑制 Th2反應的效應與加強IFN-γ產生的能力無關。GATA-3是 IL-4誘導產生的促進 Th2細胞發育的一種關鍵的轉因子 ，它能引起多種Th2型細胞 因子(如 IL一4，IL-13)的轉錄 ，還可以通過抑制IL-12Rβ2和 STAT4的表達而阻斷 Thl細胞的分化 ，IL-27正是通過GATA-3途徑 抑制 Th2型反應。

IL-27可抑制 Thl7細胞的分化

Thl7細胞作為T輔助細胞家族的一個獨立譜系已經從傳統的 Thl和Th2細胞中分離 出來。最近有研究者用 WSX-1-／- 小鼠對自身免疫性腦脊髓炎的研究結果表明，缺乏IL-27信號導致的炎癥反應加重與炎癥組織中表達IL-17的T細胞數量增多有關。盡管 IFN-γ 受體參與了抑制 Thl7細胞分化，IL-27對 IFN-γ小鼠的T細胞或抗原提呈細胞的分化仍起到抑制作用，說明陔抑制作用不依賴于INF-γ受體的存在。STAT1信號系統是IL-27和IFN-γ在細胞內的共同途徑，在 STAT1 ko 小 鼠IL-27不能抑制 IL-17的產生，而對自身免疫性腦脊髓炎易感性增加，說明 IL-27可通過STATI途徑起作用 ，但 STAT1途徑的下游基因和具體調節通路仍需深入研究。還有研究表明，IL-27還可通過下調 IL-6和 TGF-β的表達對Thl7細胞的分化起抑制作用。而 T-bet和抑制蛋白 SOCS3在 IL-27抑制 Th17細胞分化中不起作用。IL-27也可以通過下調 IL-6抑制 CD4+T細胞增殖，這說明IL-27抑制Thl7細胞分化 的作用與前面討論的 IL-27對病原體感染免疫反應的負調控作用相一致。

IL-27對調節性 T細胞的作用

IL-27不僅Th細胞有重要的調節作用，還能夠通過 TGF-β的作用抑制誘導型調節性 T細胞(inducible regulatory T cells，iTregs)的分化與增殖 ，這一點與上述IL-27的抗炎作用相一致。然而，IL-27抑制誘導型調節性T細胞產生的體內實驗研究還未見報道，IL-27受體亞單也高水平表達于調節性 T細胞 的另外一個亞群CD4+CD25+天然型調節性T細胞(natural regulatory T cells)，但至今尚未證實IL-27對其發揮促進作用還是抑制作用。

IL-27在炎癥性疾病中的作用

IL-27通過抑制特異性Th亞群細胞子的產生抑制炎癥反應的強度并發揮抗炎活性。動物實驗結果表明，WSX-1-／- 小鼠對Listeriamonocytogen。es和L.major的易感性增加，伴有 IL-6、TNF-γ 和 TNF-γ等炎癥細胞因子產生的增加 ，表明 IL-27在抵御 細胞內病原體感染的Thl型免疫中可能發揮一定的作用。而在小鼠 gondii和 cruzi及結核菌感染過程中，IL-27主要表現為限制 Thl型免疫反應的強度， WSX-1-／- 小鼠表現為產生過量IFN-γ 而形成了嚴重的肝臟壞死，這說明在不同病原體感染時細胞 因子的產生和相互作用情況不同。

IL-27對自身免疫性疾病的治療也有重要作用。前已述及，IL-27被認為參與自身免疫性疾病的發生并且可以控制免疫反應的強度和持續時間。在由Thl反應介導的實驗性自身免疫性腦脊髓膜炎和自身免疫性關節炎動物模型中，給與外源性的抗IL-27p28的抗體可有效緩解疾病的進程。另外在Thl相關性肉芽腫性疾病 (結核 、肉樣瘤病和克隆病)中表達量增， WSX-1-／- 小鼠在感染結核晚期可產生大量促炎細胞因子引起廣泛的炎癥反應而加速死亡，而給予 IL-27能夠有效抑制炎癥的進展， WSX-1-／- 小鼠膜型腎小球腎炎的發生率顯著降低。上述這些資料提示，IL-27參與這些疾病的發病過程 ，阻斷其作用可以起到治療作用【1】。IL-27可以調節T細胞的增殖分化,發揮促進炎癥反應和抗炎癥反應的雙重作用。在多個自身免疫性疾病模型中發現,IL-27能夠通過抑制Th17細胞的分化來抑制炎癥發展。現不斷有研究發現Th17細胞參與了系統性紅斑狼瘡(sys-temic lupus erythematosus,SLE)的發病,因此,IL-27在SLE的發病中也可能發揮一定作用。另外注射IL-27單抗或者放大IL-27的信號能夠抑制自身免疫性糖尿病和狼瘡小鼠的疾病發展,提示IL-27可能與SLE的治療相關【2】。原發性干燥綜合征患者外周血單個核細胞中IL-27/P28及IL-27/EBl3mRNA相對表達量及其血漿IL-27濃度均顯著低于健康對照組;原發性干燥綜合征患者血漿IL-27濃度與抗SSA抗體,抗SSB抗體及IgE水平存在一定相關性.結論IL-27在原發性干燥綜合征患者外周血中表達降低,且與原發性干燥綜合征的發生發展存在一定的相關性,其可能參與了原發性干燥綜合征的發病過程【3】。

IL-27在抗腫瘤免疫反應中的作用

由于IL-27在Thl型免疫反應中的作用，推測IL-27在抗腫瘤免疫中也發揮重要作用。Hisada和Shinozaki分別將轉染 IL-27基因的小鼠結腸癌細胞 C26、神經母細胞瘤 TBJ移植小鼠體內，發現腫瘤的生長均受到明顯抑制 ，IL-27能夠促進小鼠 CD4+T細胞的活化和特異性CTL活性增強等Thl型免疫反應 ，產生 IFN-γ 介導的抗原特異性抗腫瘤免疫，并通過活化記憶性 T細胞發揮免疫記憶的效應對同種移植瘤的再次接種產生免疫識別而清除。Motom等對低免疫原性的小鼠黑色素瘤細胞 B16F10的研究發 現，IL-27不僅通過活化免疫系統發揮抗腫瘤作用還有直接的抗血管生成作用，能夠 以 IFN-γ依賴和非依賴的形式作用于內皮細胞產生抗腫瘤趨化因子 IP-l0和 MIG而抑制新生血管生成，這個作用是通過 STAT1途徑完成的。Liu等將人食管癌細胞Ecal09細胞移植裸鼠體內研究表明，IL-27能夠活化NK細胞，通過產生IFN-γ、TNF-a等炎癥性細胞因子和促進腫瘤細胞凋亡的作用發揮抗腫瘤活性。在此過程中，炎癥性細胞因子高表達只在腫瘤移植的早期觀察到，這與 IL-27在炎癥反應中的兩面性相一致。但還沒有關于內源性 IL-27在腫瘤監視和控制中作用的研究報道。在用人外周血CD4+T細胞和單核細胞起源的巨噬細胞對 HIV感染的研究中，DNA微點陣分析結果顯示 IL-27可以誘導單核細胞起源的巨噬細胞產生各種干擾素誘導基因(IFIG)從而產生抗 HIV作用，其作用機制與IFN-a作用相似，IL-27能夠抑制HIV病毒復制但不能促進干擾素分泌【1】。胃癌患者血清IL-27表達升高,可能與胃癌發生和進展有關。2.聯合PGR和HP檢測,血清IL-27對胃癌臨床早期篩查有一定的提示作用【5】。

動物簡介

營養成分

生物學特性

遺傳信息

實驗儀器

測試流程

注意事項

1.具體的試驗周期以工程師告知的為準。

2.文章中的圖片或者標準以及具體的試驗方案僅供參考，因為每個樣品和項目都有所不同，所以最終以工程師告知的為準。

3.關于（樣品量）的需求，最好是先咨詢我們的工程師確定，避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗周期一般是五個工作日左右，部分樣品有所差異

5.如果對于（B6-IL27tm1小鼠,動物試驗）還有什么疑問，可以咨詢我們的工程師為您一一解答。