B6-Tg(hNCR3)小鼠,動物試驗

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基本信息

品系名稱：B6-Tg(hNCR3)小鼠

英文名稱：B6-Tg(hNCR3) mouse

疾病名稱：傳染病、腫瘤

相關基因：hNCR3

背景品系：C57BL/6J

遺傳類型：基因敲除

繁殖方式：HET X WT

繁殖代數：NA

研究用途：用于研究傳染性疾病、腫瘤等及信號轉導方面的研究。

飼養環境：屏障或隔離環境

培育單位：北京華阜康生物科技股份有限公司、中國醫學科學院醫學實驗動物研究所

保種單位：中國醫學科學院醫學實驗動物研究所

資源鑒定：否

鑒定日期：暫無介紹

特征描述

NKp30 的發現及分子結構

1999 年 Pende 等發現了 NKp30 受體（NCR3；CD337），是由人類 6 號染色體 HLAIII 區的 1C7 基因編碼的一種大小為 30 kDa的蛋白質，這種受體選擇性的表達在所有的 NK 細胞表面，因此可以作為分離 NK 細胞的標記物。此外，與IL-15 接觸后，NKp30 還可在臍帶血 T 細胞上表達，并且受到孕酮刺激后可表達在子宮內膜上皮細胞表面。NKp30是免疫球蛋白超家族的一員，為 I 型跨膜糖蛋白，包含一個細胞外免疫球蛋白域，負責配體結合，一個帶陽性電荷精氨酸殘基的跨膜域以及一個沒有附加信號域的胞內域。CD3ζ 同質二聚體和 CD3ζ/FcRγ 異質二聚體可與 NKp30 跨膜區的帶電精氨酸結合，并介導NK 細胞的活化。研究發現 NK 細胞表面有 6 種不同的 NKp30 剪切變異體，其中 NKp30a-c的胞外區為 v 型樣區，而另 3 個 NKp30d-f 的胞外區為c 型 Ig 樣區；基因表達時翻譯外顯子的不同導致了各種剪切變異體間胞內域的不同。其中 V 型樣區的 NKp30 亞型占總體的大多數，并且各種剪切變異體在不同組織間的分布亦表現不同。Delahaye等通過研究轉染了 3 種不同 V 型樣區 NKp30 的NKL 細胞發現不同亞型會導致 NK 細胞做出不同的應答；轉染了 NKp30a 和 NKp30b 的細胞在與靶細胞結合或共培養后釋放出大量的 IFN-γ，而轉染了NKp30c 的細胞僅能產生 IL-10 和少量的 IFN-γ。因此 NKp30a 和 NKp30b 代表免疫刺激亞型，能釋放 TH1 細胞因子，而 NKp30c 代表免疫抑制亞型，通過分泌 IL-10 來傳達免疫抑制信號；這種激活潛能的差異是由于與NKp30a 和NKp30b相比 ，NKp30c 在交叉連接后與 CD3ζ 的聯系減少了。同時有研究發現在胃腸道間質瘤中，與表達其他幾種NKp30 亞型的患者相比，表達 NKp30c 亞型患者的預后更差，這種差異可能是由 NKp30c 亞型介導的NK 細胞功能負面調節的后果【1】。

由于 NKp30 分子結構與 CD28、細胞毒T淋巴細胞相關抗原 4 ( Cytotoxic Tlymphocyte-associated antigen-4，CTLA-4) 、可誘導共刺激分子( Inducible costimulator，ICOS) 和程序性死亡受體 1( Programmed cell death protein 1，PD-1) 等 CD28 家族成員相似，因此 NKp30 被歸為 CD28 家族( 圖 1)【2】

NKp30 的相關配體

目前已發現的 NKp30 的配體有以下幾種：其中抑制性配體包括：（1）牛痘病毒屬的血凝素hemagglutinin HA；（2）人巨細胞病毒(HCMV)間層蛋白 pp65，pp65與NKp30 結合后導致NKp30與CD3ζ鏈分離，從而抑制 NKp30 介導的NK細胞活化；（3）其他未知配體，如MDSC 表面配體，通過NKp30 抑制NK細胞的功能。活化性配體包括：（1）腫瘤細胞質膜表面的 B7-H6，特異性的表達在腫瘤細胞表面，目前尚未在健康細胞中發現過 B7-H6；（2）腫瘤細胞配體：BCL2 相關永生基因 6（BAG6，也稱為 BAT3），表達在細胞核內、質膜表面以及外泌體中，NKp30 與未成熟樹突狀細胞（immature DCs） 細胞膜表面的BAG-6 結合后刺激NK細胞活化介導未成熟樹突狀細胞的死亡；（3）惡性瘧原蟲紅細胞膜蛋白 1 Pf EMPl；（4）細胞表面的肝素或硫酸肝素類蛋白聚糖，這些分子在腫瘤細胞中表達顯著上調【1、2】。

NKp30 抗腫瘤和病毒感染的作用

NKp30 抗腫瘤的作用

NKp30 在 NK 細胞抗腫瘤過程中發揮了重要的作用，目前已發現在多種腫瘤外周血或腹腔液中 NKp30 的表達下降，與此同時，NK 細胞的抗腫瘤活性隨之下降；NKp30的降低預示著NK細胞活性的下降，此外，NKp30不同亞型對患者預后的影響不同，其中表達 NKp30a 和NKp30b 亞型的患者預后較好，而表達了 NKp30c 的患者預后較差，復發風險增加。Nayeli 等通過比較30 例未經過任何治療的乳腺癌患者，10 例乳腺良性病變及 24 例健康對照者外周血 NK 細胞表面活化性受體的表達，最終發現與健康對照者相比，乳腺癌患者和乳腺良性病變患者NKp30的表達顯著下降，表明乳腺癌患者 NK 細胞的細胞毒性下降可能是乳腺癌免疫逃逸的一種新機制。來自墨西哥的一項研究發現宮頸癌及癌前病變患者外周血中NKp30 顯著下降，并且NK細胞的抗腫瘤及抗病毒感染作用也顯著下降，可能與宮頸癌對NK細胞的免疫逃逸有關。Pesce 等通過分析一組選定的漿液性卵巢癌患者腹水中腫瘤相關 NK 細胞的表型及功能，發現與自身外周血NK細胞相比，超過一半的病人腫瘤相關 NK 細胞表面 NKp30 的表達顯著降低，并且這種下降與它的一個配體 B7-H6 有關，其存在于腫瘤細胞表面或細胞內，也可以可溶性分子的形式存在于腹水中。研究發現，表達了低 NKp30 表型的 NK 細胞在消滅表達 B7-H6 的靶細胞時，干擾素IFN -γ的釋放量減少且細胞毒性功能受到抑 制 。Semeraro 等通過觀察 3 組表達了不同 NKp30 亞型的高危神經母細胞瘤獨立隊列患者的預后，發現免疫刺激亞型（NKp30a，NKp30b）與免疫抑制亞型（NKp30c）比值相同時，患者呈現出相似的預后；同時，誘導化療后緩解的高危神經母細胞瘤患者外周血及骨髓中 NK 細胞若為 NKp30c 優勢型，則患者復發的風險會增加。同時，他們還證實了神經母細胞瘤細胞表面的 B7-H6 配體可以從腫瘤細胞表面脫落，患者血清中可溶性 B7-H6 水平的升高，導致NK 細胞表面 NKp30 下調，進而抑制了 NK 細胞的殺傷活性，并且可能與疾病的骨髓轉移和產生抗藥性相關。Fend 等證實了非小細胞肺癌（NSCLC）患者 NKp30/NCR3 表達缺失，此外低表達 NKp30 的患者無進展生存期較短且遠期預后較差，表明 NK 細胞可能參與了非小細胞肺癌的免疫逃逸機制，同時可通過檢測外周血中 NKp30 的表達量對患者進行分層。此外，Castriconi研究發現轉化生長因子 β1（TGFβ1） 可 從 基 因 轉 錄 水 平 抑 制 NKp30 以 及NKG2D 的表達，進而抑制 NK 細胞的殺傷活性。研究發現，NK 細胞還可能參與了原發性肝癌的發病，在原發性肝癌患者中，NKG2D、NKp30、NKp46 等活化性受體的表達在早中期患者中含量較高，越晚期患者含量越低，而抑制性受體如 CD158b、CD159a則與之相反。

NKp30 抗病毒感染的作用

NKp30 不 僅 在NK 細胞抗腫瘤過程中發揮了不可或缺的作用，也參與了活化的 NK 細胞抗病毒感染的過程；研究表明HIV 感染會導致 NKp30 下調從而抑制 NK 細胞的免疫活性；而感染牛痘病毒則會導致 NKp30 的抑制性配體上調從而抑制 NK 細胞的免疫活性，另一方面在某些病毒感染時（如 HBV-ACLF）NKp30 的上調反而促進了疾病的進一步進展。Zou 等證實乙型肝炎病毒相關急慢性肝功能衰竭（HBV-ACLF）患者肝臟 NK 細胞的聚集和外周血中自然細胞毒性受體（NKp30 和 NKp46）的上調與疾病進展相關，并且HBV-ACLF 患者肝細胞上 B7-H6 以及 IL-32 的表達均顯著上調，他們進一步通過體外細胞毒性實驗發現 NKp30-B7-H6 相互作用通過上調 HBV-ACLF患者肝臟 IL-32 的表達，進而加重了肝細胞損傷，這些發現為自然細胞毒性受體和配體特異性識別在HBV -ACLF發病機制中的作用提供了新的見解。Mantovani 等證實 HCV 感染時 NKp30各種亞型表達水平均下調，但 NKp30 a/c 比值顯著增加，與此同時 NKp30 a/b 比值和 NKp30 b/c 比值與正常對照組相比卻無明顯變化；此外，他們還觀察到 NKp30免疫刺激亞型和肝硬化正相關，而免疫抑制亞型NKp30c 和 FIB-4（計算肝纖維化程度的一種非侵入性方法）呈負相關，揭示了 NKp30 各種亞型在肝損傷及進一步的肝纖維化中可能發揮了重要的作用。與之相反的是，Jarahian研究證實牛痘病毒感染細胞表面 NKp30 和 NKP46 受體的配體表達上調，但NKp44 和 NKG2D 配體的表達水平無明顯改變；痘病毒屬的牛痘病毒 VV 不僅可以用于人類牛痘疫苗的接種，還可用于溶瘤治療；通過選擇性的沉默細胞表面的 NCR，他們發現病毒感染細胞表面的 HA，亦可以重組可溶蛋白形式存在，能引起 NKp46介導的細胞活化，同時阻斷 NKp30 介導的細胞活化；由于 HA能阻斷NKp30的活化，牛痘病毒感染的細胞更容易逃脫NK細胞的殺傷，他們認為痘病毒屬的HA是NCR 的一個保守性配體，在病毒感染晚期通過阻斷 NKp30 介導的細胞活化導致細胞的免疫逃逸，因此可以選用 HA 缺陷的牛痘病毒用于溶瘤治療。同時，De Maria 等證實感染 HIV 患者體內 NK細胞表面 NKp30和NKp46顯著下調，并且這種下調與 NCR 介導的 NK 細胞殺傷腫瘤細胞能力的下調呈平行關系，提示感染 HIV時NK 細胞表面NKp30 及其他 NCR 的下調可能是導致 NK 細胞殺傷功能下降的機制之一，這也解釋了一部分未接受治療的患者在發生嚴重的免疫抑制前，機會性腫瘤發生率較高的原因【1】。

NKp30與真菌感染

Li 等研究證實 NKp30 在 NK 細胞識別和殺傷真菌生物如隱球菌和假絲酵母菌時發揮了關鍵的作用，NKp30 參與了 NK 細胞和真菌的結合、PI3K 信號通路的激活以及干擾素的釋放；已知 HIV感染導致的 AIDS 晚期真菌感染是大多數患者最終死亡的原因，De Maria 等已經證實 HIV 感染會導致NKp30 的下調，這可能是 AIDS 患者晚期易真菌感染的原因之一；更重要的是 Li 等發現 IL-12 能恢復HIV 感染患者 NKp30 的表達以及 NK 細胞殺傷真菌的活性，因此可通過上調 IL-12 糾正由于 NKp30 表達量減少導致的 HIV 感染患者 NK 細胞抗真菌活性缺陷。

NKp30與瘧疾

在關于 NK 細胞對瘧疾的固有免疫研究中發現，NKp30 可以直接與感染惡性瘧原蟲的紅細胞膜蛋白-1( Plasmodium falciparum erythrocyte membraneprotein-1，Pf EMP-1) 結合，導致 NK 細胞釋放穿孔素和顆粒酶 B，裂解寄生紅細胞( parasitized red bloodcells，pＲBCs) ，從而觸發 NK 細胞對 pＲBCs 的殺傷作用。但之后有研究表明 NK 細胞通過直接接觸 來 識 別 和 殺 傷 pＲBCs，NKG2D、NCＲs、CD2、DNAM-1 和 2B4 等受體不參與其中【2】。

NKp30與子宮內膜異位癥

徐紅等還發現盆腔子宮內膜異位癥患者外周血及腹腔液中的 NKp30 表達水平均明顯下調且腹腔液中下調更明顯，由 NKp30 介導的 NK 細胞殺傷功能也隨之下降，提示盆腔局部免疫功能的改變可能是導致盆腔子宮內膜異位癥發病的原因【1】。

有報道研究了NKp30的參與NK細胞活化及免疫突觸形成，PI3K-Erk1/2信號通路參與NKp30分子介導的NK細胞活化【3】。

動物簡介

營養成分

生物學特性

遺傳信息

實驗儀器

測試流程

注意事項

1.具體的試驗周期以工程師告知的為準。

2.文章中的圖片或者標準以及具體的試驗方案僅供參考，因為每個樣品和項目都有所不同，所以最終以工程師告知的為準。

3.關于（樣品量）的需求，最好是先咨詢我們的工程師確定，避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗周期一般是五個工作日左右，部分樣品有所差異

5.如果對于（B6-Tg(hNCR3)小鼠,動物試驗）還有什么疑問，可以咨詢我們的工程師為您一一解答。