B6-Crlf2tm1小鼠,動物試驗

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基本信息

品系名稱：B6-Crlf2^tm1小鼠

英文名稱：B6-Crlf2^tm1 mouse

疾病名稱：傳染性疾病、淋巴細胞白血病等

相關基因：Crlf2

背景品系：C57BL/6J

遺傳類型：基因敲除

繁殖方式：HOM X HOM

繁殖代數：NA

研究用途：用于傳染性疾病、炎癥及過敏反應、淋巴細胞白血病的研究。

飼養環境：屏障或隔離環境

培育單位：北京華阜康生物科技股份有限公司、中國醫學科學院實驗動物研究所

保種單位：中國醫學科學院醫學實驗動物研究所

資源鑒定：否

鑒定日期：暫無介紹

特征描述

CRLF2 基因的結構與功能

CRLF2 基因位于 Xp22. 3 / Ypll. 3 染色體擬常染色體區 1 ( pseudoautosomal region 1,PAR1),編碼細胞因子受體樣因子 2,即胸腺間質淋巴細胞受體( thymicstromal lymphopoietin receptor, TSLPR)。 CRLF2 與IL - 7 受體 a(IL - 7RA,CD127)相互作用,形成胸腺間質淋巴細胞生成因子( thymic stro - mal lymphopoietin,TSLP)的異二聚體受體,與 TSLP 信號結合,激活下游信號通路。 在 T 細胞和樹突狀細胞的發育、炎癥反應及過敏反應中起著重要的作用,并調節 B 細胞的增殖與凋亡,從而影響 ALL 的發生與發展【1】。

CRLF2 與 ALL 發生、發展的關系

CRLF2 表達異常

2009 年,Russell 等發現前體 B 細胞白血病涉及兩種染色體的異常,即 PAR1 的缺失和 PAR1 與 14 號染色體免疫蛋白重鏈(munoglobulin heavy chain,IGH)基因位點的異位。 P2RY 是位于CRLF2 上游的著絲粒基因,PAR1 的間隙缺損使 P2RY基因的第一個非編碼區外顯子與 CRLF2 的第一個外顯子融合,從而形成 P2RY - CRLF2 融合基因。 PAR1與 IGH 的異位形成 IGH - CRLF2 重排。 Yoda 等研究發現,CRLF2 - F232C(苯丙氨酸 232)基因突變均可以通過相應途徑使 CRLF2 高表達。

P2RY - CRLF2 融合 PARl 染色體片段的丟失,使 P2RY8 與 CRLF2 融合,形成 P2RY8 - CRLF2 融合基因,而 CRLF2 的表達受 P2RY8 啟動子驅動,故可導致 CRLF2 的高表達,CRLF2 的表達量能達到正常水平的 10 倍。 Harvey 等發現 P2RY8 - CRLF2 融合基因見于 7% 的前體 B - ALL( BCP - ALL) 和超過50% 以上的唐氏綜合征 ALL 中。

IGH@ / CRLF2 易位

免疫球蛋白重鏈位點(IGH@ )位于染色體 14q 的端粒,CRLF2 基因距端粒僅 1 Mb,因此很容易產生潛在的細胞遺傳學易位,形成 IgH - CRLF2 重 排, 通 過 IgH 增 強 子 元 件, 導 致CRLF2 的高表達。 2009 年,Russell 等報道約 5%的 BCP - ALL 患者存在 IGH@ 和 CRLF2 的易位。

CRLF2 F232C 基因突變

苯丙氨酸 232(F232C)到 CRLF2 的半胱氨酸(Cys) 產生的 CRLF2 變異可提高 JAK2 下游靶基因的活性,同樣導致 CRLF2 的高表達【1、2】。

信號分子通路

JAK/ STAT 途徑

CRLF2 缺乏內部催化活性,需依賴酪氨酸激酶 Janus(tyrosine kinase Janus,JAK)家族的酪氨酸激酶的活性。 迄今為止發現,JAK( Janus kinase) 家族包括 JAK1、JAK2、JAK3、JAK4,STATs( signal transducer and activator of transcription ) 包 括STAT1~ 6,是 JAKs 的直接底物,能將信號傳遞到細胞核內,調節特定基因的表達而具體的下游靶點激活途徑卻尚未完全闡明。 Russell 等發現僅 CRLF2表達異常尚不足以發生白血突變。 CRLF2 與 JAK 家族中的激活性突變高度相關,有研究表明發生在假激酶或激酶結構域的 ALL 伴有JAKl / JAK2 突變,CRLF2 基因重排和 JAK2 基因突變能使 B 系前體細胞轉化為細胞因子非依賴性生長的細胞。 伴有 CRLF2 易位的患者中有 50% 同時伴有 JAK1 / JAK2 激活性突變,而伴有 JAK1 / JAK2 突變的B - ALL 幾乎均伴有 CRLF2 易位【1】。有報道詳細描述了CRLF2與 JAK 突變導致功能 獲 得及信號通路的異常。IL一7RA 突 變 導 致 JAK／STAT 與 PI3K 信號通路的活化【2】。

PI3K/ mTOR 途徑

研究表明,88% 的 ALL 存在 PI3K/ AKT / mTOR 的異常活化。 PI3K/ mTOR 信號通路具體機制為:當細胞受到相關刺激后,細胞內磷脂酰肌醇 - 3 - 激酶 ( phosphatidylinositol 3 - kinase,PI3K) 活化,進而磷酸化其底物 3,4 - 二磷酸肌醇(PIP2)為 3,4,5 - 三磷酸肌醇(PIP3),并與 AkT(蛋白激酶 B)結合并使后者活化,活化的 AkT 能直接激活mTOR 復合物 1( mammal target of rapamycin complex1,mTORC1),mTORC1 磷酸化下游分子,包括翻譯抑制因子 eIF - 4E 結合蛋白 1(4E binding protein,4EBP)和核糖體蛋白 S6K1,從而促進蛋白質的合成。 Tasian等通過分析 TSLP 介導的信號通路發現 TSLP 能夠誘導 ALL 細胞中 JAK/ STAT 與 P13K/ mTOR 信號通路中包括 AKT、4EBP1、STAT5、S6 及 ERK 等多種蛋白的磷酸化,同時發現 JAK 抑制劑能減弱 JAK/ STAT 與P13K/ mTOR 信 號 通 路 中 上 述 相 關 蛋 白 的 磷 酸 化;PI3K/ mTOR 信號通路抑制劑,如雷帕霉素 ( rapamycin)、P1103、PP242 也能抑制 PI3K/ mTOR 信號通路的活化及下游靶蛋白的翻譯。 這表明此 2 種信號通路可相互作用共同影響 B - ALL 的進程病,還需要合并其他基因【1-3】。

預后相關

CRLF2 基因異常表達與不良預后相關 多數文獻報道 CRLF2高表達與不良預后相關，其復發率高于低表達患者，甚至有學者建議將 CRLF2的高表達用以指導否給予BCPALL患者干細胞移植。一些文獻還對ALL不同亞組的預后進行了分析。Chen等報道高危 ALL患兒CRLF2高表達與極差的預后相關，而標危 ALL患兒無相關性。柏林法蘭克福曼斯泰（BFM） 和意大利兒童腫瘤協會（AIEOP）都報道非高危組P2RY8CRLF2陽性患者有不良預后。Cario等報道，高危和中危ALL患兒， CRLF2基因缺損只存在于一部分高 CRLF2表達的患者，多因素分析提示主要是 P2RY8 CRLF2融合基因的作用，而不單純是 CRLF2過表達，有明顯的預后相關性。32屬于細胞遺傳學中危組 Mi等報道 CRLF2過表達并不合并其他高危細胞遺傳學異常患者的 ５年OS率與中危患者近似，多因素分析顯示 CRLF2不是獨立預后因子，因此認為 CRLF2過表達是兒童BCP ALL的中危指標。Ensor等報道單因素分析 CRLF2表達異常與不良預后相關，而多因素分析提示其作用是由其他危險因素如細胞遺傳學或 DS狀態產生，因此認為 CRLF2表達異常不是兒童 ALL的一個獨立危險因素，應歸細胞遺傳學中危組。vanderveer等觀察到無 IKZF1缺失和 BCR ABL1樣信號的 CRLF2高表達病例無復發，提示 CRLF2的預后價值可能由 IKZF1缺失和 （或）BCR ABL1樣信號引起。另外盡管大約一半 Down患兒有 CRLF2基因缺損，且 IKZF1的改變更少，但是這些患兒與非 Down 的 ＡＬＬ患兒相比，并沒有出現更差的預后【3】。

與預后不相關

部分文獻報道 CRLF2過表達與高危 復 發 不 相 關。Krawczyk等報 道 19％（8/42） 的 BCP ALL患兒有 P2RY8 CRLF2融合基因，其中4例 CRLF2高表達。 CRLF2表達異常組和非 CRLF2表達異常組相比，總生存時間與無疾病進展生存時間無明顯差異，這兩組患者的臨床和實驗室特征也無明顯差異，P2RY8 CRLF2融合基因與高復發率無相關性，因此也不建議給予更強的化療。以上文獻關于兒童 ＢＣＰＡＬＬ中 CRLF2預后價值的報道有差異，這種差異可能是由于以下原因引起：治療方案不同，危險分層標準不同，患者錄入標準不同等。Hunger等比較了 AIEOP BFM ALL2000和ＭＲＣＡＬＬ９７兩種實驗方案，P2AY8 CRLF2陽性患者的 ６年復發率沒有明顯不同，但 IGH@ CRLF2陽性患者有不同 （ALL97方案復發率高），因此認為P2RY8 CRLF2陽性提示患者有中危獨立預后，然而 IGH@ CRLF2陽性患者預后與不同治療方案有關【3】。

治療相關

急性 B 淋巴細胞白血病(acute B - cell lymphoblastic leukemia,B - ALL) 是一組生物學特征與臨床異質性很大的疾病。 B - ALL 按 B 細胞分化階段分為早前B 細胞型(early Pre B - ALL)、前體 B 細胞型(B - progenitor ALL)、普通 B 細胞型( common B - ALL)、成熟B 細胞型(B - ALL)。 兒童 B 淋巴細胞白血病的治療已經取得很大進展,據國外報道兒童 B - ALL 的長期生存率已達到 80% ~ 85%,但成人 B - ALL 的長期生存率仍不理想,僅在 35% ~ 40%。 成人 B - ALL治療效果差主要與細胞遺傳學的改變有關。 Ph 染色體是 ALL 預后不良指標,Ph 染色體陽性占兒童 B -ALL 的 3% ~ 10% ,成人的 30% 左右[2]。 Ph + ALL 的共同特點是易緩解,易復發,治療效果差。 近年隨酪氨酸激酶抑制劑(TKI)的應用,Ph + ALL 預后明顯改善。隨著分子生物技術的發展,更多的與 B - ALL 有關的基因被發現,提出了 Ph 樣 ALL( philadelphia chromosome - like acute lymphoblastic leukemia),即 Ph 陰性但預后與 Ph + 者類似。 Ph 樣 ALL 常伴 ABL1、ABL2、IKZF1 突變或缺失的一組高危前體 B - ALL。 目前已知 Ph 樣 ALL 累 及 的 基 因 有: ABL1、 ABL2、 CRLF2、CSF1R、EPOR、 JAK2、NTRK3、PDGFRB、PTK2B、 TSLP。Ph 樣 ALL 在各個年齡階段都可以見到。 CRLF2 基因的異常表達與 JAK 變異、BCR - ABLl 樣信號、IKZF 缺失相關,其高表達與兒童 B 系急性淋巴細胞性白血病高危復發及不良預后相關【3】。

目前對于此類具有 Ph 樣 B - ALL 的治療尚無較好的方案。 JAK/ STAT 和 PI3K/ mTOR 途徑信號通路抑制劑對存在 CRLF2 異常表達的 B - ALL 患者的治療提供了新的方向。 Sarah Kathleen 等利用裸鼠動物實驗證明,選擇性 JAK1 / JAK2 激酶抑制劑蘆可替尼(ruxolitinib)可以特異性抑制 JAK/ STAT 通路中 JAK2的表達和信號轉導,在有 JAK2 異常活化和 IL7RA/LNK 突變,而無 CRLF2 異常表達的 B - ALL 治療中具有重要意義;雷帕霉素在抑制 PI3K/ mTOR 途徑的同時,也 能 一 定 程 度 上 抑 制 JAK/ STAT 通 路, 在 具 有CRLF2 表達異常的 B - ALL 治療中有明顯作用。 可見,蘆可替尼和雷帕霉素在治療 CRLF2 表達異常和JAK1 / JAK2 基因突變的 B - ALL 中具有很大的潛在治療作用【1】。

動物簡介

營養成分

生物學特性

實驗儀器

測試流程

注意事項

1.具體的試驗周期以工程師告知的為準。

2.文章中的圖片或者標準以及具體的試驗方案僅供參考，因為每個樣品和項目都有所不同，所以最終以工程師告知的為準。

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4.加急試驗周期一般是五個工作日左右，部分樣品有所差異

5.如果對于（B6-Crlf2tm1小鼠,動物試驗）還有什么疑問，可以咨詢我們的工程師為您一一解答。